ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ ДЕЛЕНИЯ ЗИГОТЫ НА СИНХРОННОСТЬ РАЗВИТИЯ И УРОВЕНЬ ОБЩЕГО МЕТИЛИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ ПРИ IN VITRO ФЕРТИЛИЗАЦИИ МЫШЕЙ

Станова Алия Константиновна
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный исследовательский центр институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук», Новосибирск
aliya.stanova@mail.ru

На сегодняшний день in vitro фертилизация распространена не только в ЭКО-клиниках, но и при тиражировании сельскохозяйственных животных, создании и сохранении генетических коллекций лабораторных животных. Однако, несмотря на широкое использование in vitro фертилизации, собственный вклад этой процедуры в фенотипическую изменчивость потомков остается не до конца изученным. Наиболее критической является доимплантационная стадия, во время которой происходят различные эпигенетические процессы, например, метилирование ДНК, меняющее паттерны экспрессии генов, и, тем самым, воздействующее на фенотип потомков. Основной этап эпигенетического перепрограммирования приходится на период доимплантационного развития, который при использовании in vitro фертилизации протекает вне материнского организма.
Цель работы: исследовать степень дестабилизирующего влияния условий культивирования на развитие эмбрионов мыши при in vitro фертилизации.
Методы: эксперименты были проведены на мышах линии CD-1 SPF-статуса на базе ЦКП «SPF-виварий» ИЦиГ СО РАН. Для повышения выхода яйцеклеток проводили процедуру суперовуляции самок. Через 16 часов после инъекции hCG вымывали ооциты у самок-доноров, и проводили in vitro фертилизацию путем внесения к ооцитам сперматозоидов. Фертилизация проходила при температуре 37°С, через 6 часов после внесения спермы отмывали зиготы и переносили  в инкубатор с определенной температурой: 35°С, 37°С и 39°С на 24 часа. Спустя сутки, выбирали только 2-клеточные эмбрионы и переносили их в инкубатор с температурой 37°С, где проходило дальнейшее развитие эмбрионов до стадии морул. Фиксация состояния эмбрионов проводилась каждые 2 часа при помощи автоматического микроскопа Lionheart FX. Для анализа уровня метилирования цитозина в ДНК окрашивали эмбрионы антителами к 5mC (anti-5-methylcytosine antibody [33D3]) и пропидий йодидом.
Результаты: полученные результаты показали, что первое деление эмбрионов при температурах 37°С и 39°С проходит синхронно, в то время как при 35°С эмбрионы делятся не синхронно, и деление занимает большее время. Окрашивание эмбрионов антителами к 5mC показало, что при 37°С уровень метилирования выше, чем при 35°С и 39°С. Различия по метилированию, наблюдаемые при первом делении зиготы в разных температурных условиях, сохраняются при последующем развитии эмбрионов. 
Выводы: таким образом, установлено, что температура культивирования при первом делении эмбрионов влияет на скорость и синхронность деления эмбрионов, а также влияет на уровень метилирования цитозина в ДНК.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 20-14-00055
 

Для цитирования

Станова А.К. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ ДЕЛЕНИЯ ЗИГОТЫ НА СИНХРОННОСТЬ РАЗВИТИЯ И УРОВЕНЬ ОБЩЕГО МЕТИЛИРОВАНИЯ ЭМБРИОНОВ ПРИ IN VITRO ФЕРТИЛИЗАЦИИ МЫШЕЙ. Тезисы Девятой конференции специалистов по лабораторным животным Rus-LASA. https://doi.org/10.29296/2618723X-RusLASA2021-11

Вас может заинтересовать