Кибиткина Анастасия Анатольевна
Василевская Е.Р., Толмачева Г.С.
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова» Российской академии наук
[email protected]
Цель работы: проведение комплексной оценки репродуктивной функции, материнской заботы и развития потомства нокаутных мышей по гену TPH2, разработка успешной стратегии разведения мутантных мышей в условиях индивидуально–вентилируемых клеток
Методы: Эстральный цикл гетерозиготных нокаутных самок по гену TPH2 исследовали двумя методами: визуально и цитологически. Определяли половые предпочтения сексуально наивных и опытных самок и самцов мышей в бинарном тесте с мочевой меткой и социальные взаимодействия между однополыми конспецификами в диадическом тесте «Резидент–интрудер» [1]. Отмечали успешность бридинга после формирования гаремных групп– фертильность животных. Определяли выраженности материнской заботы путем комплексной оценки поведения самок с использованием тестов: «Гнездостроение», «Материнская агрессия», «Поисковый тест»; отмечали акты кормления и направленного каннибализма, проводили протеомный анализ молока [2]. После рождения щенков регистрировали выживаемость, оценивали физиологическое развитие – массу, отлипание ушных раковин, первичную шерсть, прорезывание резцов, открытие глаз, опускание семенников, открытие влагалища; сенсорные рефлексы – реакцию плайсинга передних и задних конечностей, двигательные рефлексы – рефлекс выпрямления, отрицательный геотаксис, мышечную силу; определяли соотношение по генотипу– гомозиготы (Ko), гетерозиготы (Het), дикий тип (Wt) [3].
Результаты: Нарушения в эстральном цикле самок TPH2 Het представлены более длительной стадией диэструса на 2,0–3,5 суток и, как следствие, сокращением количества циклов. Влияние генного фактора не задействовано в определении сексуальных предпочтений на основе обонятельной информации, однако самцы и самки TPH2 Het (как наивные, так и опытные) проявили значительно больший интерес к наивным особям TPH2 Het и Wt. Самки TPH2 Het не проявляли агрессивного конкурирующего поведения при парном контакте с самками TPH2 Het и Wt. Эффективность спаривания у мышей TPH2 Het была снижена на 10,3% по сравнению со средним показателем 75,0%. В материнском поведении обнаружены нарушения при возвращении щенков в гнездо, повышенный процент инфантицида и направленный каннибализм. У щенков TPH2 Het отмечена повышенная рефлексия с наличием импульсивных реакций до 15–х суток, за которыми следует полное развитие моторных и сенсорных рефлексов. Щенки Ko имели меньшую массу (на 15,6% и 16,0% – 14 сутки, на 30,1% и 26,8% – 21 сутки, на 20,8% и 21,3% – 28 сутки), чем щенки Het и Wt, остальные показатели их физиологического развития достоверно не отличались. Согласно полученным результатам, эффективны две схемы разведения нокаутных мышей по гену TPH2: для поддержания племенной колонии в соотношении Wt:Het:Ko 25:55:20 – спаривание самца Het с двумя самками Wt; для получения потомства в соотношении Wt:Het:Ko 63:36:0 – ссаживание самца Het с двумя самками Het.
1. Кибиткина А.А. и Василевская Е.Р., ЛЖНИ, 3, (2021). 2. Umemura S. and Imai S., PLoS ONE, 10(8), e0136016 (2015). 3. Heyne, G. A. and E. H. Plisch., JAALAS, 54 (4), 368-371 (2015).
Кибиткина А.А., Василевская Е.Р. , Толмачева Г.С. РАЗРАБОТКА ЭФФЕКТИВНОЙ СТРАТЕГИИ РАЗВЕДЕНИЯ НОКАУТНЫХ МЫШЕЙ ПО ГЕНУ TPH2 . Тезисы Девятой конференции специалистов по лабораторным животным Rus-LASA. https://doi.org/10.29296/2618723X-RusLASA2021-25