Работа выполнена без спонсорской поддержки.
Добрянская С.С., Акимов Д.Ю., Акимова М.А., Хан С.О. Входной контроль лабораторных животных от аудита поставщика до передачи в эксперимент. Лабораторные животные для научных исследований. 2022; 3. https://doi.org/10.57034/2618723X-2022-03-04
В питомниках лабораторных животных имеется достаточный ассортимент грызунов, однако, когда требуются негрызуны, выбор достаточно ограничен. Цель исследования — создать методические рекомендации по проведению входного контроля. Задачи: а) дать рекомендации по аудиту поставщика в зависимости от вида животных; б) определить правила осмотра животных и документации при получении животных; в) подобрать оптимальные сроки карантина и определить критерии ввода животных в эксперимент. Основными источниками для исследования послужили обзор литературы и законодательных документов РФ. В ходе исследования установлено, что: во-первых, при проведении аудита поставщика чек-лист для поставщика лабораторных грызунов стоит составлять согласно ГОСТу 33216–2014 «Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами»; кроликов — вышеупомянутому ГОСТу 33216–2014, а также НТП-АПК 1.10.06.002–00 «Нормы технологического проектирования предприятий малой мощности звероводческих и кролиководческих ферм», РД-АПК 1.10.06.02–13 «Методические рекомендации по технологическому проектированию предприятий малой мощности звероводческих и кролиководческих ферм крестьянских (фермерских) хозяйств»; поставщику карликовых свиней следует ориентироваться на ГОСТ 28839–2017 «Межгосударственный стандарт. Животные сельскохозяйственные. Свиньи»; учреждениям разведения хорьков, кошек и собак — на ГОСТ 33217–2014 «Правила содержания и ухода за лабораторными хищными млекопитающими»; питомникам разведения приматов — на ГОСТ 33218–2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за нечеловекообразными приматами», а также на Постановление Правительства Российской Федерации от 30.12.19 № 1937 «Об утверждении требований к использованию животных в культурно-зрелищных целях и их содержанию», которое раскрывает ряд вопросов по жизнеобеспечению обезьян. В иных случаях следует действовать согласно Директиве 2010/63/EU и учитывать 5 свобод животных.
Во-вторых, при поступлении каждое животное должно подвергаться клиническому осмотру, который осуществляет ветеринарный врач, он может назначить дополнительные инструментальные или лабораторные исследования. Кроме этого, необходимо проводить простейшие исследования, а при необходимости назначать лечебно-профилактические, а в некоторых случаях и санитарно-гигиенические мероприятия. Информацией о происхождении животных будут являться товарно-транспортная накладная и ветеринарно-сопроводительная документация установленного образца.
В-третьих, при поступлении животных требуется постановка их на карантин, во время которого ветеринарный врач проводит ежедневное наблюдение. Сроки карантина для лабораторных грызунов в зависимости от их качества и целей эксперимента могут варьировать от 5 до 15 дней, для кроликов, карликовых свиней и хищных млекопитающих — от 20 до 30 дней, приматам следует предоставить более длительный карантин до 45 дней. Критериями вывода животных являются полная стабилизация поступившей партии животных, их адаптация к новым условиям и хорошее клиническое состояние животных, подтвержденное заключением ветеринарного врача.
Лабораторные животные являются важной составляющей доклинических исследований, а их статус здоровья оказывает прямое влияние на исход эксперимента. Нередко возникают ситуации, когда имеется необходимость в приобретении животных в сторонних питомниках, и это является критическим моментом, так как требует больших сил и компетентности специалистов, чтобы определить качество лабораторных животных.
Питомники лабораторных животных на отечественном рынке обладают достаточным ассортиментом грызунов, однако, когда в качестве тест-системы требуется использование кроликов, карликовых свиней, хищных млекопитающих или приматов, выбор достаточно ограничен (табл. 1).
Ряд организаций, представленных в табл. 1, реализуют свою продукцию (животных) не только как лабораторных, но и как сельскохозяйственных и промысловых. В зависимости от организации, а также от партии к партии качество животных может разниться. Данная проблема актуализирует необходимость проведения входного контроля качества лабораторных животных при поступлении.
Под входным контролем следует считать комплекс мероприятий, который не ограничивается только приемом животных и проверкой их клинического состояния. Он представляет собой длительный и слаженный процесс, начинающийся с момента проверки организации-поставщика и завершающийся только непосредственно при передаче животных в эксперимент. Большинство этапов данного процесса регулируется законодательством Российской Федерации, Таможенного союза, методическими рекомендациями и иными нормативными актами. Однако в некоторых моментах имеются законодательные «пробелы», и здесь на помощь приходят компетентность специалистов, личный опыт организации, система риск-ориентированного подхода, что в конечном счете ведет к обеспечению эксперимента здоровым поголовьем.
Цель настоящего исследования — создать методические рекомендации по проведению входного контроля. Исходя из цели, были поставлены следующие задачи:
1) дать рекомендации по аудиту поставщика в зависимости от вида животных;
2) определить правила осмотра животных и документации при получении животных;
3) подобрать оптимальные сроки карантина и определить критерии ввода животных в эксперимент.
Основными методами исследования являлись обзор, структуризация и анализ литературы, нормативно-законодательной базы Российской Федерации, Таможенного союза, методических рекомендаций, ГОСТов. На основании материалов, собранных в ходе исследования, были выявлены наиболее важные критерии входного контроля лабораторных животных, определены его этапы и взаимосвязь компонентов, а также важность проводимых мероприятий.
В последнее 10‑летие увеличился интерес к организации доклинических центров, требованиям, предъявляемым к ним, и оценке рисков при выборе поставщика лабораторных животных [1–5].
Обеспечение центра, выполняющего научно-исследовательскую работу (НИР), тест-системой надлежащего качества является важным процессом. Как и любой процесс, закупка лабораторных животных имеет ряд ключевых точек (рис. 1).
Мы проанализировали наличие поставщиков разных видов лабораторных животных, их категорию и регламенты, которые могут быть использованы для аудита (табл. 2).
В Директиве 2010/63/EU говорится о том, что закупка животных должна проводиться в специализированном питомнике лабораторных животных [7]. Вопрос с обеспечением лабораторными грызунами в нашей стране проработан достаточно неплохо, их можно купить в специализированном питомнике, для оценки которого можно адаптировать и использовать так называемый чек-лист, предложенный М.Н. Макаровой [8]. Однако по анализу наших данных и из опыта организации следует отметить, что отрасль испытывает дефицит или полное отсутствие лабораторных кроликов, карликовых свиней, хищных млекопитающих, не говоря уже о приматах. Данный факт вынуждает ученых производить закупки у альтернативных поставщиков. В этом случае условия содержания могут отличаться от стандартных, принятых для лабораторных животных. Требовать от крестьянско-фермерского хозяйства (КФХ) или иного звероводческого учреждения контролируемых условий окружающей среды, сопоставимых с условиями лабораторий, не приходится и следует воспользоваться нормативной документацией, описывающей регламент для сельскохозяйственных или пушных зверей, при этом в ряде случаев универсальными критериями могут явиться 5 свобод животных.
Система входного контроля должна включать несколько этапов и начинаться с проверки поставщика путем проведения аудита. Аудит поставщика — это объективная оценка возможностей, рисков, проблем и потенциалов организации, с которой другая организация сотрудничает или планирует сотрудничать. Изначально проводится документарная проверка, выясняются статус организации-поставщика (питомник лабораторных животных, питомник иного характера, крестьянско-фермерское хозяйство), наличие лицензий, разрешающих документов на ветеринарную деятельность, производство и продажу животных, масштабы производства. Далее при очной проверке организации-поставщика рассматриваются зоогигиенические нормы содержания животных — условия кормления, поения, содержания и ухода, квалификация персонала, общее состояние поголовья, условия оказания ветеринарной помощи, проведение лечебно-профилактических мероприятий, мониторинга здоровья животных. Все эти факторы влияют на эпизоотическое состояние внутри организации и общее здоровье поголовья, позволяют в перспективе снизить не только риски для животных собственного питомника, но и экономические риски, оценить масштабы производства и возможность сотрудничества [9]. На этом же этапе регулируются транспортные отношения по доставке животных и устанавливается, каким образом она будет осуществляться. Транспортировка является сильным стресс-фактором, поэтому важно, чтобы при перевозке животных соблюдались нормы площади, предоставляемые животным, режимы кормления и поения, температурный режим и видовое соседство [10, 11].
После одобрения или условного одобрения компании-поставщика наступает следующий этап, а именно поставка животных. На данном этапе также необходима система входного контроля, включающая следующие моменты:
Согласно законодательству Российской Федерации, все партии животных обязательно сопровождаются ветеринарно-сопроводительной документацией (ВСД) [9, 12]. Без ветеринарных свидетельств или справок по установленным формам животные не принимаются. В данных документах отражаются место происхождения животных, эпизоотическая обстановка в регионе происхождения животных, клиническое состояние поголовья на момент отправки, перечень возбудителей заболеваний, на которые была проверена партия лабораторных животных перед отправкой, а также информация о профилактических вакцинациях и противопаразитарных обработках. Данный перечень варьирует в зависимости от вида животных (табл. 3).
На момент поставки ветеринарный специалист после проверки сопроводительной документации должен осмотреть условия транспортировки, жизнеспособность прибывшего поголовья и разместить животных на карантин с учетом поточных циклов организации и разделения зон на «грязные», «чистые» и «переходные».
Общее клиническое состояние животных оценивается ветеринарным врачом или фельдшером уже в помещениях проведения карантина при осмотре поступивших животных [16]. Полному осмотру подвергается каждое прибывшее животное с применением преимущественно физикальных методов обследования, а также люминесцентной лампы Вуда для выявления грибковых заболеваний. Данные клинического осмотра заносятся в карту клинико-диагностического исследования, диагноз на основании осмотра является предварительным, а окончательный ставится только после проведения лабораторных исследований на паразитозы и методов дополнительной диагностики, если они требуются (исследования рентгенологическое, ультразвуковое, анализы крови и мочи и др.). Если ветеринарный специалист признал общее состояние конкретного животного или группы животных неудовлетворительным, он может вернуть их поставщику, так как заведомо больные животные не подходят для проведения на них доклинических исследований. При подозрении животных на наличие заболеваний из перечня заразных, в том числе особо опасных болезней животных, по которым могут устанавливаться ограничительные мероприятия (карантин), следует немедленно заявить об этом курирующему органу — станции по борьбе с болезнями животных для дальнейшей координации действий [17].
От поступивших животных необходимо отбирать биологические образцы для проведения лабораторных исследований на паразитозы [18]. Основными методами исследования при входном контроле, принятыми в общей практике, являются: нативный мазок и флотация с применением гипернасыщенного раствора поваренной соли для фекалий, микроскопия соскобов кожи и микроскопия шерсти, взятой посредством скотч-теста, однако при необходимости могут использоваться иные методы (седиментации, флотация с другими флотационными растворами, исследование мазков из ушей и др.) [19]. Проведение паразитологических исследований имеет важное клиническое значение, так как позволяет обезопасить персонал и поголовье собственного питомника/вивария и своевременно скорректировать терапию в случае обнаружения инвазий. После выполнения лечебных мероприятий, если инвазионные агенты были обнаружены, стоит провести повторные лабораторные исследования, чтобы убедиться в эффективности терапии.
После приемки животных все поголовье независимо от вида поставщика (специализированный питомник или иной) ставится ветеринарным специалистом на карантин. Данные мероприятия являются профилактическими и направлены на недопущение заноса возбудителей инфекционных и инвазионных заболеваний животных и человека на территорию, куда ввозят определенный вид животных [20]. Важность карантинных мероприятий имеет большое значение, так как животные могут находиться на стадии инкубационного периода каких‑либо инфекционных процессов, транспортировочный стресс может ослабить иммунную систему животных и, как следствие, привести к заболеваемости. Сроки проведения карантина животных различны и зависят от вида (табл. 4).
На момент проведения карантина необходимо обеспечить особое обслуживание животных. Лучше всего если процессы кормления, поения, уборки, ухода и лечебно-профилактических мероприятий будет осуществлять отдельный персонал, который не контактирует с остальными животными питомника. В случае невозможности предоставления данной системы обслуживания необходимо пользоваться дополнительными средствами защиты при работе с животными, находящимися на карантине. Данные животные обязательно должны располагаться в отдельных помещениях с наличием дополнительных дезбарьеров (дезинфицирующие коврики, маты, шлюзы и др.), с отдельной системой вентиляции и индивидуальными емкостями для сбора отходов. Сотрудники, заходя в помещения к животным, находящимися на карантине, обязательно должны надевать дополнительные средства индивидуальной защиты, одноразовые костюмы, маски, перчатки, бахилы, которые после работы сразу снимаются и утилизируются [9]. Если в период адаптации или карантина у животных проявляются признаки инфекционных заболеваний, следует провести дополнительные исследования. При подтверждении инфекционного заболевания мыши, крысы, хомяки, морские свинки и кролики всей поступившей партии должны уничтожаться, а в отношении собак, кошек и других животных сроки карантина продлеваются в зависимости от установленного заболевания [9].
В период карантина производится стабилизация животных, их адаптация к новым условиям. В отношении лабораторных животных существуют стандарты, которым следует большинство питомников, что приводит к меньшему стрессу, а после выстраивания зоосоциальных связей способствует их быстрому привыканию к новым условиям контролируемой среды. Когда мы говорим о кроликах, карликовых свиньях и хорьках, поставщиками которых часто являются сельскохозяйственные предприятия, следует помнить о возможности теплового, светового, кормового и/или иного вида стресса. Особо остро данный вопрос встает в зимний и летний периоды. Для хорьков следует учитывать сезонность и период гона у самок, который наступает в феврале–мае (чаще в апреле). Квартирные и зоопарковые условия уже более похожи на лабораторные и считаются более контролируемыми. При рассмотрении адаптации у кошек, собак, нечеловекоообразных приматов следует уделять особое внимание темпераменту животного, его ориентированности в отношениях с персоналом и сородичами, формированию гармоничной группы. Все вышеперечисленные усилия позволят ускорить процесс адаптации животных к новым условиям.
На период карантина за животными должны проводиться ежедневный осмотр и термометрия [19]. Минимум на сутки после поступления животным необходимо предоставить покой для адаптации и акклиматизации в новых условиях, после этого можно начинать лечебно-профилактические мероприятия, предусмотренные для данного цикла содержания [22]. Планы лечебно-профилактических мероприятий разрабатываются ветеринарными врачами для каждого вида животных в соответствии с требованиями законодательства и накопленного опыта специалистов, с учетом наиболее часто встречающихся проблем [23]. Для всех видов животных должны быть предусмотрены обработка от экто- и эндопаразитов, для карликовых свиней, кроликов, собак и кошек — видоспецифичные вакцинации, для приматов — исследования на туберкулез. Если при паразитологических исследованиях выявлены возбудители, против которых схемы лечебно-профилактических мероприятий не предусмотрены, то разрабатываются дополнительные схемы против конкретных возбудителей. В случае заболеваний неинфекционного характера (травматизм, проблемы терапевтического, хирургического характера) животному обязательно оказывается ветеринарная помощь в соответствии с характером проблемы [24].
По завершении лечебно-профилактических мероприятий и срока проведения карантина животные переводятся в резерв, откуда уже могут быть переданы в доклинические исследования. На этом этапе ветеринарный врач снова проводит клинический осмотр каждого животного с занесением информации об осмотре в акт приемки-передачи животных из питомника в виварий. Данные мероприятия являются конечной точкой в контроле здоровья и состояния животных перед передачей их в эксперимент.
Исходя из вышесказанного, следует отметить, что входной контроль лабораторных животных играет ведущую роль в получении здорового поголовья из стороннего питомника и, как следствие, достоверных данных в ходе эксперимента. Он состоит из нескольких связанных между собой этапов, игнорирование любого из которых может привести к критическим последствиям. Начиная от аудита поставщика и заканчивая передачей в эксперимент входной контроль обеспечивает поддержание благополучной эпизоотической обстановки в организации, здоровье не только лабораторных животных собственного питомника, но и персонала, снижает экономические риски для организации, позволяет своевременно выявлять и предотвращать заболевания поступивших животных.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
С.С. Добрянская — согласие нести ответственность за все аспекты работы, надлежащее изучение и решение вопросов, связанных с достоверностью данных или целостностью всех частей статьи.
Д.Ю. Акимов — утверждение окончательного варианта статьи для публикации.
М.А. Акимова — существенный вклад в концепцию или дизайн работы; сбор, анализ или интерпретация результатов работы.
С.О. Хан — написание текста, работа с табличными данными.