Методика вскрытия и извлечения органов лабораторных животных. Сообщение 5: кролик, хорек

Введение

Кролики и хорьки – стандартные биологические модели для изучения свойств лекарственных препаратов (токсичности, фармакокинетики), а также моделирования некоторых патологий человека и других животных, как врожденных, так и приобретенных.

Лабораторные кролики подходят для длительно текущих исследований, например для оценки метаболизма липопротеидов, моделирования и изучения сердечно-сосудистых патологий, в частности атеросклероза, гипертрофической кардиомиопатии. Кролики – единственные лабораторные грызуны, с помощью которых можно получать рекомбинантные фармацевтические белки. Также они являются уникальными моделями для исследования перорально или внутрижелудочно вводимых лекарственных форм, так как только кроликам можно ввести таблетки без нарушения целостности их оболочек. Кроме того, лабораторных кроликов используют для разработки и изучения новых хирургических методов, физиологических тестов и исследования различных видов токсичности для тестирования лекарственных препаратов [8].

Хорьки чаще всего выступают в качестве тест-системы для изучения вирусных заболеваний вследствие их высокой восприимчивости, в частности к вирусу гриппа. Помимо этого, на хорьках нередко проводят исследования органов слуха, зрения, рвотного рефлекса, бактериальных инфекций. В последнее время хорьки все чаще предлагаются в качестве альтернативы более крупным лабораторным животным – собакам и приматам по причине сходства многих анатомических, метаболических и физиологических особенностей с человеком [5].

Цель данной работы – разработка методики вскрытия и извлечения органов лабораторных кроликов и хорьков.

Данная методика разрабатывалась в НПО «Дом Фармации» на самцах и самках кроликов (n=15) и хорьков (n=6). Масса исследованных животных составляла: самцов кроликов – 2,0–5,0 кг, самок кроликов – 2,0–5,0 кг, самцов хорьков – 0,5–1,0 кг, самок хорьков – 1,0–2,0 кг. Для исследования использовали животных, подлежащих эвтаназии в ходе текущих экспериментов. Специально для отработки методики некропсии животных не эвтаназировали.

Животные были подвергнуты эвтаназии с помощью передозировки анестетиком [7, 9], а именно препаратами «Ксила» и «Золетил», вводя максимальный объем вещества для наркотизации исследуемых животных. После установления факта смерти выполняли некропсию с извлечением органов и тканей.

Методика вскрытия и извлечения органов

1. Провести общий осмотр животного на наличие внешних изменений кожного покрова, слизистых оболочек, обнаружения любого рода повреждений.

2. Положить труп животного на спину и зафиксировать конечности при помощи резинок в устройстве для фиксации (рис. 1, а).

3. Обильно смочить шерстный покров шеи, грудной и брюшной стенки водой.

4. Пинцетом захватить и приподнять кожу с подлежащей подкожной клетчаткой в каудальной части живота, надрезать ее и сделать продольный разрез по белой линии живота от паха до основания нижней челюсти таким образом, чтобы брюшная стенка осталась неповрежденной (рис. 1, б, в).

5. Сделать по 2 разреза кожи в области паха от средней линии к конечностям.

6. Отсепарировать кожу в области брюшной стенки у кроликов – тупым концом ножниц или аккуратно, стараясь не сдавливать брюшную стенку, отделить кожу пальцами; у хорьков – отсепарировать кожу и подкожную клетчатку ножницами или скальпелем (рис.1, г), далее оттянуть и зафиксировать кожные лоскуты резинками (рис. 1, д).

7. Для вскрытия брюшной полости необходимо сделать разрез мышечной стенки от паха вдоль средней линии, приподняв пинцетом участок брюшной стенки (рис. 2, а, б).

8. Грудную полость необходимо вскрыть 2 разрезами (слева и справа) по бокам от грудины (по средне-подмышечной линии) косо краниально, перерезая ребра и мягкие ткани (рис. 2, в, г).

9. Для исследования костного мозга отобрать грудную кость целиком, отделив от нее мечевидный отросток, ребра и мягкие ткани (рис. 3).

10. Извлечь грудную долю тимуса, расположенную между листками предсердечного средостенья (рис. 4).

11. Извлечь сердце, перерезав удерживающие его сосуды (рис. 5).

12. Извлечь нижнечелюстные слюнную железу и лимфатические узлы (рис. 6).

13. Удалить мышцы, лежащие над трахеей (рис. 7, а, б) и извлечь гортань с трахеей, щитовидной и паращитовидной железой (рис. 7, в–е)

14. Для извлечения языка и глотки сделать разрезы дна ротовой полости скальпелем (рис. 8, а, б). После этого захватить отсепарированные мышцы и язык и оттянуть каудально (рис. 8, в). Далее сделать надрез в области твердого неба у входа в глотку, сохранив целостность глотки (рис. 8, г). Отделить язык вместе с глоткой (рис. 8, д, е).

15. Для извлечения легких, участка трахеи и пищевода перерезать зафиксированные пинцетом трахею и пищевод в области шеи (рис. 9, а). Затем отделить пищевод от аорты, аккуратно подтягивая органокомплекс краниально, после чего перерезать трахею и пищевод в области диафрагмы (рис. 9, б) и извлечь органокомплекс (рис. 9, в).

16. Отделить пищевод от извлеченного ранее органокомплекса (рис.  10).

17. Отделить оставшуюся в грудной полости аорту от позвоночника (рис. 11).

18. Извлечь селезенку, расположенную в области левого подреберья брюшной полости (рис. 12, а, б). Далее отделить селезенку от жировой ткани (рис. 12, в, г).

19. Извлечь участок поджелудочной железы, лежащий в брыжейке двенадцатиперстной кишки (рис. 13).

20. Извлечь желудок, отделив его в краниальной части от пищевода (рис. 14, а), а в каудальной – от двенадцатиперстной кишки (рис. 14, б, ж). У хорька: сделать разрез желудка по большой кривизне (рис. 14, в, г) и прополоскать в физиологическом растворе (рис. 14, д, е), освободив от содержимого. У кролика: сделать разрез желудка по большой кривизне (рис. 14, з), после чего удалить содержимое (большое количество растительного корма) и прополоскать в физиологическом растворе (рис. 14, и, к), освободив от остатков кормовых масс. Обратите внимание, что после вскрытия желудка нельзя прикасаться к его слизистой оболочке, для промывания захватить его пинцетом с внешней стороны (со стороны серозной оболочки).

21. Извлечь фрагменты тонкой и толстой кишки длиной 3–4 см: тонкую – отступив от желудка около 3 см (рис. 15, а, б); толстую – у хорька извлечь участок, отступив краниально от прямой кишки около 3 см (рис. 15, в, г); у кролика – извлечь часть восходящей ободочной кишки (рис. 15, д, е). После извлечения отделить от окружающих тканей и освободить от содержимого, прополоскав в физиологическом растворе.

22. Извлечь печень вместе с желчным пузырем. Для этого перерезать удерживающие орган серозные связки: венечную, прикрепляющуюся к диафрагме, почечно-печеночную, желудочно-печеночную и печеночно-двенадцатиперстную (рис. 16, а–в). У кроликов и хорьков после взвешивания отбирается по кусочку размером около 3х3 см от каждой доли, а также участок, к которому прилежит желчный пузырь.

23. Извлечь надпочечники (рис. 17, а) и отделить от окружающей жировой ткани (рис. 17, б, в). Извлечь почки (рис. 17, г) и отделить от окружающей жировой ткани (рис. 17, д, е).

24. При необходимости исследования мочи провести ее отбор при помощи шприца перед иссечением мочевого пузыря (рис. 18, а). Извлечь орган, перерезав шейку пузыря (рис. 18, б).

25. У самок: извлечь правый и левый яичники (рис. 19, б); извлечь матку – шейку, тело и рога (рис. 19, в–д).

26. У самцов: отделить семенники вместе с придатками (рис. 20, а, б), отделить придатки от семенников (рис. 20, в, г). Извлечь предстательную железу (рис. 20, д, е).

27. Извлечь глаз вместе с веками, слезной железой и зрительным нервом. Сделать круговой надрез кожи вокруг глаза (рис. 21, а). Далее, удерживая веки пинцетом, постепенно надрезать подлежащие ткани (рис. 22, б, в), извлекая глазное яблоко, зрительный нерв и прилежащую слезную железу (рис. 22, г).

28. Извлечение головного мозга осуществляется следующим образом. Отсепарировать кожу и подлежащие мягкие ткани от затылка до переносицы (рис. 22, а–д). Вскрыть черепную коробку двумя распилами (рис. 22, е), соединив их сзади на большом отверстии затылочной кости, а спереди – как показано на рис. 22, ж (для хорьков) и рис. 22, з (для кроликов). После вскрытия черепа удалить черепную коробку и извлечь головной мозг (рис. 23, и–л).

29. Для лучшей фиксации слизистой оболочки носовой полости необходимо предварительно промыть носовые ходы раствором фиксатора (рис. 23, а). Отбор тканей носовых ходов и синусов производится следующим образом: после извлечения головного мозга отделить от черепа кожу и мышцы (рис. 23, б). Осторожно, избегая повреждения рук верхними резцами, выполнить поперечный распил верхней челюсти на уровне глаз (рис. 23, в), тем самым отделяя препарат носовых ходов (рис. 23, г).

30. Гипофиз (рис. 24) фиксируется вместе с черепом после извлечения головного мозга, удаления мягких тканей, нижней челюсти и препарата носовых ходов.

31. Извлечь необходимые скелетную мышцу и периферический нерв. Для этого сделать глубокий разрез кожи, отпрепарировать кожу и фасции, затем извлечь скелетную мышцу и нерв (рис. 25).

32. Фиксация отделов спинного мозга производится вместе с позвоночным столбом без извлечения мозга из спинномозгового канала. При необходимости, предусмотренной планом исследования, позвоночник извлечь целиком, перед фиксацией разделив его на соответствующие анатомические отделы; в том случае, если такой необходимости нет – извлечь участок поясничного отдела (3–5 сегментов) (рис. 26, а, б). Для подготовки спинного мозга к фиксации необходимо рассечь вдоль позвоночника мышцы спины, пересечь с обеих сторон поперечные отростки позвонков и ребра, после чего максимально очистить позвоночный столб от мягких тканей (рис. 26, в)

Заключение

Предложена методика, которая позволяет:

• обеспечить полное последовательное вскрытие лабораторных животных для досконального исследования всех полостей, систем органов и различных частей тела животного;
• провести извлечение всех необходимых органов и тканей, в том числе предусмотренных планом исследования;
• минимизировать повреждения структур и избежать загрязнения в процессе некропсии органов и тканей, исключая возникновение некоторых артефактов при последующем гистологическом исследовании.