СРАВНЕНИЕ СПОСОБОВ СОЗДАНИЯ КСЕНОГРАФТА ИЗ МАЛОГО КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК И ФРАГМЕНТОВ ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Бокова У.А., Алифанов В.В., Фролова А.А., Третьякова М.С., Чердынцева Н.В., Перельмутер В.М., Денисов Е.В.
НИИ онкологии, Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук, г. Томск
pushkay@yandex.ru

Применение ксенографтов является одним из основных инструментов для изучения туморогенности и прогрессирования злокачественных новообразований, в т.ч. рака молочной железы (РМЖ). Для создания подобных моделей необходимы иммунокомпетентные животные и большое число клеток (106-107 и более). Эта задача трудно достижима в клинической практике, что связано с маленьким размером опухолевого материала пациента и методом его забора. В связи с этим, актуальным вопросом является подбор минимально возможного количества клеток, а также оптимального способа для получения успешной модели.
Цель исследования – изучить особенности создания ксенографта РМЖ из первичных клеток
Материалы и методы. Для создания ксенографта было взято 10 самок мышей линии Nude в возрасте 8 недель. В первом опыте 10 мышам подкожно в область спины при помощи инсулинового шприца вводилась суспензия первичных опухолевых клеток от 13 пациенток с РМЖ (клетки выделяли из опухоли, транспортируемой в пробирках с DМЕМ+AB/гентамицин, путём механической диссоциации). Клеточная суспензия (от 60 тыс. до 800 тыс. живых клеток) вводилась мышам со средой DMEM и с матригелем по стандартному протоколу в объеме 100 мкл. Во втором опыте 6 мышам в область молочных желёз подшивали фрагмент первичной опухоли от 5 пациентов, делали вертикальный надрез около 7-8 мм, кончиками ножниц формировали карман, вкладывали в него фрагмент опухоли и накладывали швы. Фенотипирование опухолевых клеток проводилось методом проточной цитофлуориметрии с использованием антител против CD45, EpCAM, CD44, CD24, N-cadherin, CK7 и Ki67.
Результаты. В первом опыте при подкожном введении суспензии первичных клеток в первые сутки сохранялась небольшая припухлость, связанная с содержанием в инокуляте матригеля. Ни одной опухоли не было обнаружено, что, вероятно, связано с введением небольшого количества клеток (менее 1 млн.). Во втором опыте все фрагменты опухолей, взятых от пациентов с РМЖ, прижились. При извлечении фрагментов через 2-3 недели была отмечена развитая сосудистая сеть, а также частичное врастание в мышцы живота с образованием соединительной ткани. Фенотипический анализ показал изменение количественного состава популяций опухолевых клеток в ксенографтах по сравнению с первичной опухолью молочной железы. Так, увеличивалось количество EpCAM-положительных клеток и их пролиферативного потенциала (Ki67). Напротив, доля CK7-положительных клеток и их пролиферативный статус снижались.
Выводы. Трансплантация фрагмента первичной опухоли является наиболее эффективным способом получения ксенографтов  по сравнению с введением суспензии клеток.
  
Исследование выполнено за счёт гранта Российского научного фонда (проект №19-7530016).

Для цитирования

Бокова У.А., Алифанов В.В., Фролова А.А., Третьякова М.С., Чердынцева Н.В., Перельмутер В.М., Денисов Е.В. СРАВНЕНИЕ СПОСОБОВ СОЗДАНИЯ КСЕНОГРАФТА ИЗ МАЛОГО КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК И ФРАГМЕНТОВ ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ. Тезисы Девятой конференции специалистов по лабораторным животным Rus-LASA. https://doi.org/10.29296/2618723X-RusLASA2021-17

Вас может заинтересовать