СРАВНЕНИЕ СПОСОБОВ СОЗДАНИЯ КСЕНОГРАФТА ИЗ МАЛОГО КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК И ФРАГМЕНТОВ ОПУХОЛИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Бокова У.А., Алифанов В.В., Фролова А.А., Третьякова М.С., Чердынцева Н.В., Перельмутер В.М., Денисов Е.В.
НИИ онкологии, Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук, г. Томск
[email protected]

Применение ксенографтов является одним из основных инструментов для изучения туморогенности и прогрессирования злокачественных новообразований, в т.ч. рака молочной железы (РМЖ). Для создания подобных моделей необходимы иммунокомпетентные животные и большое число клеток (106-107 и более). Эта задача трудно достижима в клинической практике, что связано с маленьким размером опухолевого материала пациента и методом его забора. В связи с этим, актуальным вопросом является подбор минимально возможного количества клеток, а также оптимального способа для получения успешной модели.
Цель исследования – изучить особенности создания ксенографта РМЖ из первичных клеток
Материалы и методы. Для создания ксенографта было взято 10 самок мышей линии Nude в возрасте 8 недель. В первом опыте 10 мышам подкожно в область спины при помощи инсулинового шприца вводилась суспензия первичных опухолевых клеток от 13 пациенток с РМЖ (клетки выделяли из опухоли, транспортируемой в пробирках с DМЕМ+AB/гентамицин, путём механической диссоциации). Клеточная суспензия (от 60 тыс. до 800 тыс. живых клеток) вводилась мышам со средой DMEM и с матригелем по стандартному протоколу в объеме 100 мкл. Во втором опыте 6 мышам в область молочных желёз подшивали фрагмент первичной опухоли от 5 пациентов, делали вертикальный надрез около 7-8 мм, кончиками ножниц формировали карман, вкладывали в него фрагмент опухоли и накладывали швы. Фенотипирование опухолевых клеток проводилось методом проточной цитофлуориметрии с использованием антител против CD45, EpCAM, CD44, CD24, N-cadherin, CK7 и Ki67.
Результаты. В первом опыте при подкожном введении суспензии первичных клеток в первые сутки сохранялась небольшая припухлость, связанная с содержанием в инокуляте матригеля. Ни одной опухоли не было обнаружено, что, вероятно, связано с введением небольшого количества клеток (менее 1 млн.). Во втором опыте все фрагменты опухолей, взятых от пациентов с РМЖ, прижились. При извлечении фрагментов через 2-3 недели была отмечена развитая сосудистая сеть, а также частичное врастание в мышцы живота с образованием соединительной ткани. Фенотипический анализ показал изменение количественного состава популяций опухолевых клеток в ксенографтах по сравнению с первичной опухолью молочной железы. Так, увеличивалось количество EpCAM-положительных клеток и их пролиферативного потенциала (Ki67). Напротив, доля CK7-положительных клеток и их пролиферативный статус снижались.
Выводы. Трансплантация фрагмента первичной опухоли является наиболее эффективным способом получения ксенографтов  по сравнению с введением суспензии клеток.
  
Исследование выполнено за счёт гранта Российского научного фонда (проект №19-7530016).